کیت تشخیص مولکولی Thrombo4X
کیت تشخیص مولکولی Thrombo4X
Thrombo4X Kit
تشخیص هم‌زمان چهار واریانت ژنتیکی مرتبط با مطالعات ترومبوفیلی
Thrombo4X Kit یک کیت مولکولی چندهدفه مبتنی بر Real-Time PCR است که برای شناسایی چهار واریانت ژنتیکی مهم در مطالعات مرتبط با استعداد ترومبوتیک طراحی شده است:
Factor II (Prothrombin) G20210A
Factor V Leiden (G1691A)
MTHFR C677T
MTHFR A1298C
این طراحی امکان بررسی هم‌زمان مجموعه‌ای از مارکرهای ژنتیکی مرتبط با مسیرهای انعقادی و متابولیسم فولات را در یک پنل واحد فراهم می‌کند.
Thrombo4X یک راهکار مناسب برای آزمایشگاه‌هایی است که به‌جای انجام تست‌های ژنتیکی به‌صورت جداگانه، به دنبال یک پنل مولکولی جامع برای بررسی چهار واریانت منتخب هستند.
ترومبوفیلی چیست؟
Thrombophilia یا استعداد افزایش‌یافته برای تشکیل لخته خون، می‌تواند در اثر عوامل ژنتیکی و/یا اکتسابی ایجاد شود.
در ترومبوفیلی ارثی، برخی تغییرات ژنتیکی می‌توانند بر سیستم انعقاد، تنظیم هموستاز یا سایر مسیرهای مرتبط با تشکیل لخته اثر بگذارند.
در میان واریانت‌های ژنتیکی مورد مطالعه، Factor V Leiden و Prothrombin G20210A از مهم‌ترین واریانت‌های شناخته‌شده در زمینه ترومبوفیلی ارثی هستند.
در مقابل، واریانت‌های MTHFR C677T و MTHFR A1298C مربوط به ژن متابولیسم فولات هستند و از نظر ارتباط با ترومبوز و ترومبوفیلی باید با احتیاط و در چارچوب شواهد علمی تفسیر شوند.
بنابراین، مثبت شدن هر یک از اهداف Thrombo4X به‌تنهایی معادل تشخیص قطعی ترومبوفیلی نیست.
اهداف مولکولی کیت Thrombo4X
1. Factor II G20210A
ژن F2 کدکننده پروتئین Prothrombin است که یکی از اجزای اصلی سیستم انعقاد خون محسوب می‌شود.
واریانت G20210A در ناحیه 3′ غیرترجمه‌شونده ژن F2 قرار دارد و با تغییر در سطح پروترومبین و افزایش استعداد ترومبوتیک در افراد حامل ارتباط دارد.
این واریانت معمولاً با نام‌های زیر شناخته می‌شود:
Factor II G20210A
Prothrombin G20210A
F2 G20210A
rs1799963
شناسایی این واریانت یکی از کاربردهای مهم ژنتیک مولکولی در بررسی ترومبوفیلی ارثی است.
2. Factor V Leiden G1691A
ژن F5 کدکننده فاکتور V انعقادی است.
واریانت G1691A که با عنوان Factor V Leiden شناخته می‌شود، موجب تغییر اسیدآمینه در فاکتور V شده و مقاومت نسبی فاکتور V فعال‌شده در برابر Activated Protein C (APC) ایجاد می‌کند.
این وضعیت می‌تواند موجب افزایش فعالیت مسیر انعقادی و افزایش استعداد تشکیل لخته شود.
Factor V Leiden یکی از شناخته‌شده‌ترین عوامل ژنتیکی مرتبط با Venous Thromboembolism (VTE) است.
این واریانت با شناسه:
rs6025
نیز شناخته می‌شود.
3. MTHFR C677T
ژن MTHFR در متابولیسم فولات و تنظیم مسیر متابولیسم هموسیستئین نقش دارد.
واریانت C677T که در نام‌گذاری فعلی با c.665C>T / p.Ala222Val نیز شناخته می‌شود، یکی از پلی‌مورفیسم‌های شایع ژن MTHFR است.
ژنوتیپ‌های این واریانت شامل:
C/C
C/T
T/T
هستند.
وجود این واریانت می‌تواند در برخی افراد با تغییر فعالیت آنزیم MTHFR و تحت شرایط خاص با تغییر سطح هموسیستئین همراه باشد.
با این حال، MTHFR C677T به‌تنهایی یک تشخیص برای ترومبوفیلی محسوب نمیشود و تفسیر آن باید با توجه به وضعیت فولات، ویتامین B12، سطح هموسیستئین و شرایط بالینی انجام شود.
4. MTHFR A1298C
واریانت MTHFR A1298C یکی دیگر از پلی‌مورفیسم‌های شایع ژن MTHFR است.
این واریانت در نام‌گذاری فعلی با:
c.1286A>C / p.Glu429Ala
شناخته می‌شود و دارای سه ژنوتیپ اصلی:
A/A
A/C
C/C
است.
مانند C677T، این واریانت یک پلی‌مورفیسم شایع است و وجود آن به‌تنهایی نشان‌دهنده بیماری یا ترومبوفیلی قطعی نیست.
طراحی چهارهدفه Thrombo4X
یکی از ویژگی‌های مهم Thrombo4X، ترکیب چهار هدف ژنتیکی در یک سیستم آزمایشگاهی است.
کیت شامل دو PCR Mix اصلی است:
F2-F5 Mix
برای شناسایی:
Factor II G20210A
Factor V Leiden G1691A
MTHFR Mix
برای شناسایی:
MTHFR C677T
MTHFR A1298C
این ساختار باعث می‌شود بررسی چهار مارکر در یک پنل منظم و استاندارد انجام شود.
تکنولوژی Real-Time PCR
Thrombo4X بر پایه Real-Time PCR و روش تشخیص مبتنی بر TaqMan Probe طراحی شده است.
در این روش، پروب‌های اختصاصی برای اهداف ژنتیکی مورد نظر، سیگنال فلورسانس ایجاد می‌کنند و دستگاه Real-Time PCR بر اساس الگوی سیگنال، وضعیت آللی نمونه را تعیین می‌کند.
این روش امکان:
حساسیت و اختصاصیت بالا
تشخیص هم‌زمان چند هدف
کاهش زمان انجام آزمایش
حذف مراحل پس از PCR مانند الکتروفورز
تفسیر مستقیم سیگنال‌های فلورسانس
را فراهم می‌کند.
کانال‌های فلورسانس
مطابق مشخصات محصول، سیستم Thrombo4X از چند کانال فلورسانس برای تفکیک اهداف و کنترل‌های مختلف استفاده می‌کند، از جمله:
Green / FAM
Yellow / VIC
Orange /